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山慈菇探針法PCR鑒定試劑盒說明書

更新時間:2025-12-02

簡要描述:

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特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)地黃保守序列設(shè)計的專一性引物,與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。

產(chǎn)品名稱

山慈菇探針法PCR鑒定試劑盒說明書

英文名稱

pleiones

貨號

BH-P99549

使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗阪崎腸桿菌檢驗要求進行。
2、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 6 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管,分別為 76,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
注:上述樣品建議經(jīng)過增菌后,收集培養(yǎng)物用于檢測。
二、DNA提?。?/span>
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液,按以下說明進行DNA核酸的粗提。也可采購上海澤葉生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品,并按照相應(yīng)試劑盒說明進行操作。
1、液體培養(yǎng)物:取液體培養(yǎng)物100μL加到1.5mL無菌離心管中,8000rpm離心3min,盡量吸棄上清,加入50μL DNA抽提液充分混勻,100恒溫10min,13000rpm離心3min,取上清5μL進行PCR反應(yīng)。
2、固體培養(yǎng)物:挑取單克隆菌落與50μL DNA抽提液充分混勻,100恒溫10min,13000rpm離心3min,取上清5μL進行PCR反應(yīng)。
3、糞便樣品:挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中,加入0.5mL生理鹽水,振蕩混勻,13000rpm離心3分鐘,棄上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻,100恒溫10min,13000rpm離心3min取上清5μL進行PCR反應(yīng)。
4、其他液體標本:取標本2-3mL13000rpm離心3min,棄上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻,100恒溫10min,13000rpm離心3min取上清5μL進行PCR反應(yīng)。
注:陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取),直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對照濃度較高,建議在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。
實驗流程:
1. 整個檢測過程應(yīng)嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作,各區(qū)實驗服、儀器 、耗材應(yīng)獨立使用,不能混用;實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進行操作;三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解,樣本處理過程應(yīng)在0-4條件下操作,且完成實驗后立即上機檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實驗應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標本準備區(qū),并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進行任何標記。
7. 儀器 擴增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進行設(shè)置;不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進行無害化處理后方可丟棄。
儲存條件:
14或-20樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
CD19 Others Mouse 小鼠 CD19 / Leu-12 人細胞裂解液 (陽性對照) 匹格列酮鹽酸鹽(標準品)Pioglitazone HCl質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品

人滋養(yǎng)層絨毛細胞裂解物HVTL苯噻啶蘋果酸鹽Pizotifen Malate質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR

IFNA8 Others Human Ierferon alpha-B / IFNA8 人細胞裂解液 (陽性對照) 硫酸多粘菌素BPolymyxin B Sulfate質(zhì)量規(guī)格:>6500 IU/mg,USP30

BALB/C小鼠肝上皮細胞;BNL 1ME A.7R.1硫酸多粘菌素B(標準品)Polymyxin B Sulfate質(zhì)量規(guī)格:含量測定

QSG-7701細胞,人胚肝細胞正常 APP-PS1雙基因轉(zhuǎn)染CHO細胞株,7WPS1細胞 中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆); EPO-CHO-T醋酸普蘭林肽Pramlintide Acetate質(zhì)量規(guī)格:度≥98.0%
Promocell C-26011 Renal Epithelial Cell GrowthMedium KIT, 腎上皮細胞生長培養(yǎng)基套裝 500mlN4-苯甲?;?/span>-5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯基)-2'-脫氧胞甘(DMT- Bz- dCBz-DMT-dC質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR

肝細胞培養(yǎng)基HMN6-苯甲?;?/span>-5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)-2'-脫氧腺苷(DMT-dA-Bz)Bz-DMT-dA質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR

LAMP2 Others Cymolgus 食蟹猴 LAMP2 人細胞裂解液 (陽性對照) 2,2'-聯(lián)-4-勒皮啶2,2'-Bi-4-lepidine質(zhì)量規(guī)格:

人胚肺成纖維細胞;WI-38 [WI38]2,2'-聯(lián)嘧啶(>95.0%(GC))2,2'-Bipyrimidyl質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(GC)

SUNE-1亞株13-9B細胞,人鼻咽癌細胞系 小鼠胚胎成纖維細胞,BALB/3T3 clone A31細胞 CM-H063人腎皮層上皮細胞*培養(yǎng)基100mL2,2'-二辛可寧酸(>98.0%(HPLC))2,2'-Bicinchoninic Acid質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)
MDA-MB-157(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2醋酸德舍瑞林質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRDeslorelin Acetate

Anglne(人卵巢癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CM-R067大鼠腎足突細胞*培養(yǎng)基100mL 人胚腎細胞-F克隆;293F;去氨壓素質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR,醋酸鹽形式 Acetate

CM-H071人腎動脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基100mL地塞米,氟美(標準品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品Dexamethasone

SPHK1 Others Human SPHK1 / Sphingosine Kinase 1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 卓質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRDiltiazem HCL

人表皮色素細胞-胎兒HEM-f(標準品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定,標準品Diltiazem HCL
山慈菇探針法PCR鑒定試劑盒說明書SLAMF6 Others Human Ly108 / SLAMF6 人細胞裂解液 (陽性對照) LY2940680質(zhì)量規(guī)格:>98%LY2940680

人滋養(yǎng)層絨毛細胞總RNAHVT NALY2886721 質(zhì)量規(guī)格:>98BACE1 inhibitorLY-2886721

小鼠神經(jīng)皮質(zhì)細胞(MN-c)(1×106)利尼伐尼;ABT869質(zhì)量規(guī)格:>98%,VEGFR/PDGFR抑制劑 Linifanib (ABT-869)

家貓皮膚細胞;FCA-S1頭孢匹林鈉(標準品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定Cefa

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